抗菌劑指能夠在一定時間內(nèi),使某些微生物(細菌、真菌、酵母菌、藻類及病毒等)的生長或繁殖保持在必要水平以下的化學物質(zhì)??咕鷦┛咕阅艿暮门c否可以從兩方面來判斷即各文獻中分類的抑菌作用(即靜菌力)與殺菌作用(即殺菌力)。因此,抗菌劑抗菌性能傳統(tǒng)檢測方法中,包括靜菌力評價與殺菌力評價兩方面的內(nèi)容。
作為第三方檢測中心,中科檢測機構擁有CMA和CNAS認證檢測資質(zhì),檢測設備齊全,數(shù)據(jù)科學可靠,可出具國家認可的抗菌劑抗菌性能檢測報告。
抗菌劑抗菌性能檢測:靜菌力
?。?)靜菌力大多數(shù)情況下采用電導率法或者 MIC 法來評價。
電導率法:在不補充營養(yǎng)液的情況下,細菌在生長過程中,會逐步消耗營養(yǎng)液中的蛋白質(zhì),提取其所需的物質(zhì)而放出有機酸和氨基酸兩種電解質(zhì)。因此,細菌生長越快,由于沒有外來營養(yǎng)物質(zhì)的加入,營養(yǎng)液中電解質(zhì)濃度就越大,其導電性也越好,電導率也就越大。將沒有加入抗菌劑的營養(yǎng)液作為參照物,一定時間內(nèi),對比加入抗菌劑營養(yǎng)液電導率的變化趨勢,能夠有效地反應抑菌作用的大小。
MIC法:MIC是指使阻礙細菌發(fā)育所需的抗菌劑的最小濃度。MIC值越小,抗菌劑的靜菌活性越大,即表示抗菌劑的抑菌作用越好。MIC測定有兩種方法,其一是液體稀釋法。取一沒有接種細菌的空白營養(yǎng)液作為參照物,使用營養(yǎng)液連續(xù)稀釋抗菌劑,將細菌接種到已稀釋抗菌劑的營養(yǎng)液,觀察營養(yǎng)液的渾濁情況。當出現(xiàn)與空白營養(yǎng)液透明度相當?shù)臐舛葧r,此時抗菌劑的濃度即為其MIC值。二是固體稀釋法,也叫培養(yǎng)基法。先傾倒培養(yǎng)基,然后將混有不同濃度抗菌劑的細液體涂布到培養(yǎng)基上,恒溫下放置一天,觀察開始沒有細菌生長的最小濃度即為其MIC值。
抗菌劑抗菌性能檢測:殺菌力
殺菌力可以用直接計數(shù)、滅菌率和抑菌圈三種方法來評價,在各方法的測定檢測時,因為抗菌材料形態(tài)與檢測操作的不同,所以檢測手段也會有很多種。
試驗中常用的也是最直觀表現(xiàn)殺菌性能的就是抑菌圈指標-抑菌環(huán)法。激活細菌,使其達到對數(shù)期,此時用滅菌生理鹽水調(diào)節(jié)其濃度到108個ml,然后與營養(yǎng)液混合,傾倒在培養(yǎng)皿中,一同固化成試驗平板,把實驗所需的抗菌劑加工成圓盤,緊貼平板置于平板中央。37℃下培養(yǎng)18h后,在圓盤的周圍會出現(xiàn)沒有細菌生長的空白圓環(huán)(抑菌圈),測量抑菌圈直徑的大小,與標準圓壞對比,評價抗菌材料殺菌力。
抗菌劑抗菌性能檢測:操作步驟
本實驗分別采用抑菌圈法和 MIC法來表征樣品的殺菌力和靜菌力。
將已高溫滅菌的 LB 瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全融化,快速的倒在培養(yǎng)皿內(nèi),每個培養(yǎng)皿 15ml,待其完全凝固。此外,將融化的LB 瓊脂培養(yǎng)基冷卻到50℃左右(溫度不可過高,會殺死細菌,又不可過低,要不然培養(yǎng)基將重新凝固)混入試驗菌,將混有菌的培養(yǎng)基5ml加到已凝固的培養(yǎng)基上待凝固(上層)。
在無菌操作環(huán)境下,在混合培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯(內(nèi)徑6mm、外徑 8mm、高10 mm 的圓形小管,已高溫滅菌),輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基緊密接觸,在牛津杯中加入待檢抗菌劑樣品,牛津杯一般情況下可以裝240微升,勿使其外溢。加滿后置37℃培養(yǎng)16-18小時,觀察結果,抑菌用尺直接量就可以。在培養(yǎng)中,一方面試驗菌開始生長,另一方面抗生素呈球面擴散,離杯越近,抗生素濃度越大,離杯越遠抗生素濃度越小。隨著抗生素濃度減小,有一條最低抑菌濃度帶,在帶范圍內(nèi),菌不能生長,而呈透明的圓圈,這就叫“抑菌圈”。抗生素濃度越高,抑菌圈越大。
本實驗采用培養(yǎng)基法來測定其最小抑菌濃度。