流行病等細(xì)菌感染相關(guān)疾病是對(duì)公共衛(wèi)生的主要威脅，已成為全球的十大死亡原因之一。因此，迫切需要新的、高效的策略來(lái)對(duì)抗細(xì)菌感染，并有大量的努力致力于開(kāi)發(fā)替代抗菌劑?？咕鷦┑臍⒕Ч绾?，需要通過(guò)一系列體外抗菌實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。
作為第三方檢測(cè)中心，中科檢測(cè)機(jī)構(gòu)擁有CMA認(rèn)證檢測(cè)資質(zhì)，檢測(cè)設(shè)備齊全，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，可出具國(guó)家認(rèn)可的體外抗菌性能評(píng)價(jià)報(bào)告。
體外抗菌性能評(píng)價(jià)方法：孔徑抑菌法
孔徑抑菌法是一種簡(jiǎn)單常用的體外抗菌測(cè)定方法。其原理是將待測(cè)物質(zhì)溶解于培養(yǎng)基中，然后在瓊脂平板上制作不同直徑的孔洞，將待測(cè)物質(zhì)溶液滴入孔洞中，觀察細(xì)菌在孔洞周?chē)纳L(zhǎng)情況。如果待測(cè)物質(zhì)具有抑菌作用，則孔洞周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)無(wú)菌區(qū)域。
操作步驟：
1.準(zhǔn)備瓊脂平板和待測(cè)物質(zhì)溶液。
2.在瓊脂平板上制作不同直徑的孔洞。
3.將待測(cè)物質(zhì)溶液滴入孔洞中。
4.培養(yǎng)—定時(shí)間后，觀察孔洞周?chē)纳L(zhǎng)情況。
體外抗菌性能評(píng)價(jià)方法：最小抑菌濃度法
最小抑菌濃度法是一種定量評(píng)估待測(cè)物質(zhì)對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的抑制能力的方法。其原理是在一系列濃度梯度的待測(cè)物質(zhì)溶液中接種細(xì)菌，通過(guò)觀察最低有效濃度來(lái)評(píng)估其抗菌活性。
操作步驟：
1.準(zhǔn)備—系列待測(cè)物質(zhì)溶液，濃度遞增。
2.在試管中加入一定濃度的待測(cè)物質(zhì)溶液和細(xì)菌懸液。
3.培養(yǎng)—定時(shí)間后，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。
4.根據(jù)最低有效濃度判斷待測(cè)物質(zhì)的抗菌活性。
體外抗菌性能評(píng)價(jià)方法：平板計(jì)數(shù)法
抗菌劑對(duì)細(xì)菌進(jìn)行殺菌處理以后，將細(xì)菌稀釋到合適的倍數(shù)進(jìn)行平板涂布并對(duì)長(zhǎng)出的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)計(jì)算細(xì)菌存活率或者致死率來(lái)表征抗菌劑抗菌效果。
體外抗菌性能評(píng)價(jià)方法：活死染色法
對(duì)細(xì)菌進(jìn)行活死染色也是一種常用的表征抗菌效果的方法?？咕鷦?duì)細(xì)菌進(jìn)行處理后，再對(duì)細(xì)菌進(jìn)行活死染色。
目前有許多品牌的細(xì)菌活死染色試劑盒，以SYTO-9和PI為例，SYTO-9是一種能夠透過(guò)細(xì)胞膜的綠色熒光核酸染料，可用于活的和死的真核細(xì)胞的RNA和DNA染色，以及革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌。
PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色劑，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。PI不能穿透完整細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。
體外抗菌性能評(píng)價(jià)方法：清除生物膜法
近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)界對(duì)某些環(huán)境中常見(jiàn)細(xì)菌所致的一些慢性和頑固性疾病的深入了解，發(fā)現(xiàn)生物膜（生物被膜）是導(dǎo)致這些細(xì)菌性疾病難以根治的主要原因。
以生物膜形式存在的細(xì)菌對(duì)抗生素等殺菌劑、惡劣環(huán)境及宿主免疫防御機(jī)制有很強(qiáng)的抗性，因此評(píng)價(jià)抗菌劑對(duì)生物膜的抑制效果也是評(píng)價(jià)抗菌劑殺菌效果的標(biāo)準(zhǔn)之一。
通過(guò)結(jié)晶紫染色觀察生物膜剩余面積或者測(cè)其OD值可以表征抗菌劑對(duì)生物膜的抑制效果。另外也可以用過(guò)熒光共聚焦成像來(lái)表征對(duì)生物膜的抑制效果。
