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　　上文講述了真菌毒素檢測方法中的氣相色譜及其聯(lián)用方法，接下來小編講解真菌毒素檢測的方法當(dāng)中的另一個方法：氣相色譜及其聯(lián)用方法。

 

　　酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA）始于20世紀(jì)70年代，是一種將抗原和抗體的特異性免疫反應(yīng)和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來的真菌毒素檢測技術(shù)。隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展應(yīng)用及免疫試劑盒的商業(yè)化，ELISA 已廣泛應(yīng)用于分析檢測領(lǐng)域。

 

　　其基本原理是在不損壞其免疫活性的條件下把抗原或抗體預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面；測定時，將受檢樣品(含待測抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體起反應(yīng)形成抗原或抗體復(fù)合物；反應(yīng)終止時，固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量(免疫復(fù)合物)即與標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量成一定比例；

 

　　經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)，加入酶反應(yīng)底物后，底物即被固相載體上的酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，最后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待測物質(zhì)含量。在真菌毒素檢測中應(yīng)用這樣一種快速、簡便、特異靈敏的技術(shù)，意義尤為重大。

 

　　用上述法檢測發(fā)現(xiàn)，18批中成藥中黃曲霉毒素B，(AFB)的含量均小于1 ug kg-'；測定30種常用藥材及7個品種20批次中成藥中的黃曲霉毒素B，30種藥材中黃曲霉毒素B含量最低值為5.46 ug kg-'，最高值為35.94 ug kg-'；20批中成藥中黃曲霉毒素B最低為16.66 ug kg-'，最高為49.60 ug kg'；生等測定了20批中藥材及2批中成藥中AF的含量，AF的含量范圍為О~200 ug kg-'，18批中藥材AFB含量超過5 ug kg-'，2批制劑中 AFB含量分別為23.7 ug kg-'和29.5 ug kg-'。

　　采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定杏仁、酸棗仁、牽牛子、冬瓜子等種子類中藥材中AFB，的含量。結(jié)果表明，所測樣品均有不同程度的AFB污染，其中一批益智仁中AFB含量超過20ug kg-'。采用自制抗-OTA兔血清抗體(IgC)及雞卵黃抗體(IgY)建立了檢測OTA的ELISA方法。檢測IgCG和 IgY的靈敏度分別為10ng mL-'和1 ng mL-'。

 

　　制備了基于玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)-陽離子化蛋白結(jié)合物的ZEN抗體。ZEN通過曼尼西反應(yīng)與陽離子化牛血清白蛋白(cBSA)配對。BALB/c(系)小鼠與ZEN-cBSA 免疫接觸后，迅速誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫反應(yīng)。ZEN 多克隆抗血清和單克隆抗體的滴定度分別為30000 和20000，與5種類似物的交叉反應(yīng)率分別為小于7%和小于2%。隨后建立了基于ZEN單克隆抗體的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法，用該法檢測中藥中ZEN的回收率為80%~120%，變異系數(shù)小于15% 。

 

　　構(gòu)建了檢測AFM的直接競爭-酶聯(lián)免疫吸附（dc-ELISA)體系，將辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)與高純度抗AFM單克隆抗體進(jìn)行偶聯(lián)后對其與AFM競爭性反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，并利用AFM污染標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMI -BD282(O)、ERMI -BD283 (0.11 ug kg-')、ERMI -BD284(0.44 ug kg-')等對檢測體系的靈敏度和精確性進(jìn)行驗證。檢測范圍為0.015~4.05 ug L-'，平均回收率為80% ，dc-ELISA可滿足AFM國家殘留限量標(biāo)準(zhǔn)0.5ug kg-'的檢測要求。

 

　　以上就是小編關(guān)于真菌毒素檢測的方法當(dāng)中的另一個方法：氣相色譜及其聯(lián)用方法的歸納總結(jié)，希望對大家有所幫助。還想了解更多檢測項目繼續(xù)關(guān)注第三方檢測機(jī)構(gòu)——中科檢測。（原文出處：中藥中真菌毒素檢測方法的最新研究進(jìn)展）